【项目简介】

糖原合成酶(glycogen synthase,GS)是肝糖原合成的关键酶。本项目发明的目的在于提供斑马鱼糖原贮积症gys1和gys2基因突变体的构建方法，基于斑马鱼和人类基因组的相似性高达87％，选择斑马鱼为对象，利用CRISPR/Cas9系统敲除斑马鱼gys1和gys2基因，获得不同基因突变类型的斑马鱼，斑马鱼产卵量大，繁殖周期短，胚体透明，便于研究斑马鱼糖原合成酶基因对于糖原贮积症的作用，以及糖原贮积症的发病进程及详细机制。项目包括以下步骤：选择斑马鱼gys1基因序列的第四个外显子序列设计gys1基因敲除的靶点，gys2基因序列的第三个外显子序列设计gys2基因敲除的靶点，根据上述靶点序列设计扩增引物，以pUC19‑scaffold plasmid为模板进行PCR扩增，经纯化和体外转录获得gys1和gys2基因敲除靶点gRNA，再将gRNA与Cas9蛋白导入斑马鱼受精卵中，获得稳定遗传的斑马鱼gys1和gys2基因纯合突变体。

【应用领域】

本发明涉及斑马鱼基因遗传学技术领域，具体涉及CRISPR/Cas9系统介导的斑马鱼糖原贮积症gys1和gys2基因突变体的构建方法。

【技术亮点】

本发明通过CRISPR/Cas9基因编辑技术构建gys1-/-和gys2-/-纯合突变体，获得的gys1-/-(-7bp)纯合子表型与人类糖原贮积症相似，糖原贮积症的发病原因受多种信号通路调控，糖原合成酶gys1和gys2对糖原合成通路具有重要作用，利用gys1-/-和gys2-/-斑马鱼模型有助于进一步研究人类糖原贮积症的发病进程及详细机制。